شناسایی آلودگی مایکوپلاسما اوراله در کشت‌های سلولی با استفاده از روش PCR

زمینه و اهداف: آلودگی کشت‌های سلولی توسط مایکوپلاسماها مسئله‌ای مهم در فناوری کشت سلولی محسوب می‌شود. میزان بالایی از کشت‌های سلولی آلوده به مایکوپلاسما اوراله هستند که عموماً توسط کارکنان آزمایشگاه صورت می‌گیرد. بنابراین شناسایی و تشخیص آن به‌منظور جلوگیری از زیان‌های مهم به دنبال آلودگی با این ریزاندامگان‌ها(Microorganisms) بسیار حائز اهمیت است. هدف این مطالعه راه‌اندازی و به‌کارگیری روش واکنش زنجیره پلی‌مراز به‌عنوان روشی سریع، حساس و اختصاصی برای تشخیص مایکوپلاسما اوراله در آلودگی‌های کشت سلولی و فراورده‌های زیست‌شناختی است. مواد و روش کار: با به‌کارگیری سویه استاندارد مایکوپلاسما اوراله، تست PCR با استفاده از جفت پرایمرهای اختصاصی گونه مایکوپلاسما اوراله در ناحیه ژن 16S rRNA راه‌اندازی گردید. 62 نمونه‌ کشت سلولی مشکوک به آلودگی مایکوپلاسما ارجاعی به آزمایشگاه رفرنس مایکوپلاسما موسسه رازی پس از استخراجDNA مورد آزمایش PCR قرار گرفتند. یافته‌ها: تست PCR راه‌اندازی‌شده باDNA مایکوپلاسما اوراله دارای واکنش مثبت بود، در صورتی که با سایر گونه‌های مایکوپلاسما نظیر: مایکوپلاسما سالیواریوم، مایکوپلاسما هیورینیس، مایکوپلاسما آرژنینی، آکولوپلاسما لایدلاوی، مایکوپلاسما فرمنتانس، مایکوپلاسما پنومونیه و همچنین با اشریشیا کلی و استرپتوکوکوس پنومونیه واکنش نداد که نشان‌دهنده ویژگی بالای این تست بود. از تعداد 62 نمونه کشت سلولی 42 نمونه از نظر جنس مایکوپلاسما و 8 نمونه از نظر گونه مایکوپلاسما اوراله مثبت بودند. نتیجه‌گیری: با توجه به میزان بالای آلودگی کشت‌های سلولی به مایکوپلاسما اوراله و ویژگی بالای تست PCR راه‌اندازی‌شده در این مطالعه، به‌کارگیری این روش در تشخیص آلودگی کشت‌های سلولی در آزمایشگاه‌های کشت سلولی توصیه می‌گردد.